●プライマー配列（5’→3’）/アンプリコンシーケンス解析（illumina MiSeq）用
1st_PCR_515F_MIX：
ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-NNNNN–GTGCCAGCMGCCGCGGTAA
1st_PCR_806RB_MIX：
GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-NNNNN–GGACTACNVGGGTWTCTAAT

細字：アダプター配列（2nd PCR用のプライマーとの相同部分）
赤字 N：シーケンス解析時における品質向上を目的として、0-5塩基の異なる長さのランダム配列が挿入された混合プライマーです
太字：16S rRNA との相同配列

●参考文献
Apprill et al. Aquat. Microb. Ecol. (2015) 75:129-137
※515F-806Rの改良版です。海洋表層中の自由生活性細菌であるSAR11クレードのDNAを検出されやすく改変されました。

●1stPCR後の増幅長
約370 bp

1stPCRの反応組成と反応条件例

以下は、 PCR 酵素に ExTaq HS [TaKaRa]を使用した例です。
他の PCR 酵素を使用する場合は、そのPCR酵素推奨の反応組成・反応条件で調製してください。