環境DNA 種特異的解析（リアルタイムPCR解析・デジタルPCR解析）
環境中のDNAを種特異的なプライマーセットでPCR増幅しながら、特定生物の在・不在やDNAのコピー数を解析します。
プライマーの設計・合成から承っています。
1. 環境DNA 種特異的解析（リアルタイムPCR解析・デジタルPCR解析）
| リアルタイムPCR解析 | デジタルPCR解析 | ||
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| 価格 | 3サンプル以上の場合（注1） 15,000円/サンプル（税別） ＜内訳＞ ・ろ過 4,000円/サンプル ・DNA抽出 3,000円/サンプル ・リアルタイムPCR解析 8,000円/サンプル ※30サンプル以上で15％引き |
3サンプル以上の場合（注1） 15,000円/サンプル（税別） ＜内訳＞ ・ろ過 4,000円/サンプル ・DNA抽出 3,000円/サンプル ・デジタルPCR解析 8,000円/サンプル ※30サンプル以上で15％引き |
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| 解析系がある生物種 | ブルーギル、オオクチバス、コクチバス、アユ、アユモドキ、オオサンショウウオ、チュウゴクサンショウウオ、ハクバサンショウウオ、ニホンウナギ、イワナ、ヤマメ、イシドジョウ、ゲンジボタル、ヘイケボタル、ニホンザリガニ、ウチダザリガニ、など ※記載のない生物種についてはご相談ください。 対象の生物種やその近縁種、生息する生物種などの情報をご連絡下さい。プライマーやプローブは、in silicoで設計するため、対象の生物種のみを検出できる保証はできません。対象生物や近縁種の個体やDNAをお送り頂ければ、特異性の検証を行うことも可能です（3サンプルまで）。 |
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| 納期 | 20サンプルまで5営業日 ※プライマーの設計・合成が必要な場合は、プライマー合成完了後5営業日です。 ※ダウンロード納品の場合の納期です。記録媒体をご希望の場合、お手元に結果が届くのは５営業日＋1-2日（配達に要する日数）です。 |
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| 納品物 | 以下のデータをダウンロード形式で納品します。 ・報告書 ・解析データ（※データを確認するには専用のソフトウェアが必要です。ソフトウェアは無料です。） |
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| オプション | 定量解析 （DNAコピー数の算出） |
20サンプルごと：＋30,000円/依頼・生物種（税別） ※8反復で解析の場合は、10サンプルごと上記料金必要 |
不要（デジタルPCRは定量が基本です） |
| 解析の反復 | 8反復： +4,000円/サンプル（税別） より正確なデータを得るため、リアルタイムPCRを標準の4反復から８反復へ増やすオプションです。 |
4反復： +4,000円/サンプル（税別） より正確なデータを得るため、デジタルPCRを標準の2反復から4反復へ増やすオプションです。 |
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注1） 2024年9月より3サンプル以上での受け入れとなりました。1-2サンプルの場合、内訳のリアルタイムPCR解析またはデジタルPCR解析が一律24,000円（3サンプル分）がかかります。
2. 環境DNAを用いた種特異的解析の流れ
 （お客様） サンプルの送付 |
水サンプル(1 L)を冷蔵便で送付下さい。 必ず「依頼書(環境DNA用)」を同封してください。 冷蔵保管と発送が難しい場合は下記を参考にしてください。 |
| ↓ | |
| ろ過 | フィルターを用いて、ろ過を行います（弊社標準フィルターは、ステリべクス-GP 0.22 μmです。水の濁度が高いなど、標準フィルターだけではろ過が難しい場合は、プレフィルターも用いてろ過を行います）。 |
| ↓ | |
| DNA抽出（注2） | フィルターに捕集された物質からDNAを抽出します。抽出DNAからPCR阻害物質を除去した後、DNA濃度を測定します。 |
| ↓ | |
| リアルタイムPCR解析 または デジタルPCR解析 |
リアルタイムPCR:LightCycler 96システム（Roche）等を使用して解析を行います。 デジタルPCR：QX200 Droplet Digital PCR(BIO-RAD)を用いて解析します。 |
注2）抽出されたDNAは、別の種の種特異的解析（追加料金：8,000円/サンプル・生物種）や メタバーコーディング解析にも使用することが可能です(追加料金: 20,000円/サンプル)。
3. 環境DNAを用いた種特異的解析の具体例
解析具体例① 群馬県と神奈川県におけるブルーギルとオオクチバスの在/不在（リアルタイムPCR解析）
上段がブルーギル、下段がオオクチバスの結果で、分母が反復数、分子が検出回数を示しています。ブルーギルはTakahara et al.,2013、オオクチバスはYamanaka et al., 2016の方法を参照し、解析を行いました。
●使用機器
LightCycler 96システム（Roche）等を使用し、上記のようなデータで在・不在を判断します。
解析具体例② アユの定量解析 2つの解析方法の比較結果
注3）魚類の網羅的解析のサンプル調製時に内部標準を入れてPCRを行うことで、網羅的解析の結果に定量性の情報も得られる手法です。上記は、その結果の中からアユの数値を抜粋しました。
4. パンフレット
5. お問合せ・お見積り依頼
●お問合せ・お見積り依頼
お見積り依頼フォームをご用意しています。また、お問合せフォーム、メール（dna@gikenbio.com）、または お電話（042-780-8333）でお気軽にご相談ください。
●サンプル送付先
株式会社生物技研
〒252-0154 神奈川県相模原市緑区長竹657 / TEL 042-780-8333
※平日着でお送りください。発送は元払いでお願いしています。
＜添付書類＞
・依頼書（環境DNA用）→サンプル送付時に同封ください。
